T3 EIA Kit – 96 Test:

ENZYME IMMUNOASSAY FOR THE QUANTITATIVE

DETERMINATION OF TRIIODOTHYRONINE (T3)

IN HUMAN SERUM

REAGENTS

Materials provided with the kit:

 Goat Anti-Mouse IgG Coated Microtiter Wells, 96 wells

 Enzyme Conjugate Concentrate (11x), 1.3 ml.

 Enzyme Conjugate Diluent, 13 ml.

 T3 Reference Standards, 0, 0.75, 1.5, 3.0, 6.0 and 10.0 ng/ml, 1

set, 1.0 ml each, ready to use.

 Antibody Reagent, 7 ml.

 TMB Reagnet (One-Step), 11 ml.

 Stop Solution (1N HCl), 11 ml

Materials required but not provided:

 Precision pipettes: 50 l, 100 l and 1.0 ml.

 Disposable pipette tips.

 Distilled water.

 Vortex mixer or equivalent.

 Absorbent paper or paper towel.

 Graph paper.

 Microtiter plate reader.

ASSAY PROCEDURE (how to use)

1. Secure the desired number of coated well in the holder. Make

data sheet with sample identification.

2. Pipette 50 l of standard, samples, and controls into

appropriate wells.

3. Dispense 50 l of the Antibody Reagent into each well. Mix

thoroughly for 30 seconds.

4. Add 100 l of Working Conjugate Reagent into each well.

Mix thoroughly for 30 seconds. It is important to have a

complete mixing in this step.

5. Incubate at room temperature for 60 minutes.

6. Remove the incubation mixture by flicking plate contents into a

waste container.

7. Rinse and flick the microtiter wells 5 times with distilled or

deionized water. (Please do not use tap water.)

8. Strike the wells sharply onto absorbent paper to remove

residual water droplets.

9. Dispense 100 l TMB Reagent into each well. Gently mix for

10 seconds.

10. Incubate at room temperature in the dark for 20 minutes

without shaking.

11. Stop the reaction by adding 100 l of Stop Solution to each

well.

12. Gently mix for 30 seconds.

 It is important to make sure that the blue color changes to

yellow color completely.

13. Read OD at 450 nm with a microtiter reader within 15

minutes.